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- Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban
- v.53(4); 2024 Aug 25
- PMC11375484
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Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2024 Aug 25; 53(4): 527–530.
Chinese. doi:10.3724/zdxbyxb-2023-0561
PMCID: PMC11375484
PMID: 39183059
Language: Chinese | English
张 豪城,1,2,3 施 丽冰,1,2,3 王 海潮,1,2,3 and 竺 海燕1,2,3
Guest Editor (s): 余 方 and 沈 敏
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Abstract
一例15岁霍奇金淋巴瘤患者行一个疗程化疗后来浙江大学医学院附属邵逸夫医院生殖中心进行生育力保存。在卵巢组织冷冻保存期间发现1枚MⅡ成熟卵母细胞和3枚生发泡期卵母细胞。3枚未成熟卵母细胞行体外成熟培养未获得成熟卵子,最终玻璃化冷冻1枚成熟卵母细胞和12片卵巢皮质。提示对于青春期性腺轴反馈已建立患者,卵巢组织冷冻不是唯一的生育力保存方式,可考虑促排卵取卵冻存卵母细胞,或根据月经周期判断处于排卵期者,在卵巢组织冷冻前尝试穿刺取卵获得自然周期成熟卵母细胞行卵母细胞冷冻,从而提高患者生育力保存概率。
Keywords: 生育力保存, 青春初期, 卵巢, 冷冻, 卵子, 体外成熟培养, 病例报告
Abstract
A 15-year-old female with Hodgkin’s lymphoma underwent ovarian tissue cryopreservation for preserving fertility in Reproductive Department of Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University School of Medical after receiving one course of chemotherapy. During the ovarian tissue cryopreservation, one MⅡmature oocyte and three germinal vesicle oocytes were found. The three immature oocytes underwent in vitro maturation but failed. Ultimately, one mature oocyte and 12 ovarian cortex slices were cryopreserved using vitrification. This case indicates that for patients with established gonadal axis feedback, ovarian tissue cryopreservation may not be the only method for fertility preservation. It is advisable to consider ovarian stimulation and oocyte retrieval for oocyte cryopreservation. Alternatively, for individuals in the ovulation phase of their menstrual cycle, attempting oocyte retrieval before ovarian tissue cryopreservation to obtain mature oocytes from the natural cycle, followed by oocyte cryopreservation, may enhance the likelihood of successful fertility preservation.
Keywords: Fertility preservation, Early adolescence, Ovarian, Refrigeration, Ovum, In vitro maturation, Case report
近年来,恶性肿瘤患者发病呈年轻化趋势,年轻恶性肿瘤患者经治疗后其生殖内分泌功能恢复和生育能力维持已成为重要的社会问题。对于青春期后的女性来说,保留生育能力最常用的方法是通过卵巢刺激,采集成熟卵子或胚胎进行冷冻保存。然而,对于青春期前女性,由于卵巢功能受到促性腺激素释放激素水平的抑制,卵泡发育和自然排卵受阻[1],卵巢组织冷冻保存联合IVM技术是唯一可供选择的生育力保存方式。然而,研究表明IVM后卵母细胞发育潜力较差,胚胎发育能力也较成熟卵母细胞低[2]。因此,德国妇产科学会及生殖医学会专家共识提出,对患者提供卵巢组织冷冻生育力保存的同时必须考虑冻存成熟卵母细胞的可能性[3]。但是,目前临床上从青春期前及青春期女性卵巢组织中获得成熟卵母细胞的报道仍较少。本研究团队近年从一例15岁霍奇金淋巴瘤患者卵巢皮质中获得成熟卵母细胞一枚,报道如下。
1. 病例资料
未婚女性,15岁,2021年起因霍奇金淋巴瘤在外院行化疗:2021年7月21日于当地医院行C1D1程ABVD方案化疗(长春地辛+达卡巴嗪+博来霉素+表柔比星),出现白细胞降低;2021年8月6日至12月23日行C1D1-C6D15程ABVD方案化疗(表柔比星+博来霉素+长春新碱+达卡巴嗪);2022年3月3日开始行C1程IGEV方案化疗(泼尼松+长春瑞滨+异环磷酰胺+吉西他滨)。C1程IGEV方案化疗第1次治疗后,于2022年3月24日来浙江大学医学院附属邵逸夫医院咨询生育力保存。患者既往体健,身高164 cm,体重47 kg,体重指数17.5 cm/kg2;门诊查随机性激素水平(月经周期第18天):卵泡刺激素4.32 U/L,黄体生成素13.76 U/L,雌二醇83.44 ng/L,孕激素0.64 μg/L,抗米勒管激素为2.59 mg/L。患者第二性征已发育,月经已来潮,周期规律(周期30 d,经期7 d),末次月经开始时间为2022年3月6日。经肛门妇科超声显示,患者子宫大小正常,双侧卵巢大小正常,右侧可见6~7个窦卵泡,左侧5~6个窦卵泡。患者血常规、肝肾功能、心电图等结果正常。恶性肿瘤是生育力保存的主要适应证之一。联合血液科、妇产科、生殖内分泌科等专家进行多学科讨论,综合血液科治疗方案、患者及家属的生育力保存意愿,并充分告知患者及其家属化疗药物对卵巢及卵子相关风险以及移植卵巢组织后可能会面临恶性肿瘤细胞转移和复发的风险,于2022年3月25日为该患者行腹腔镜下右侧卵巢切除后冷冻保存。本研究通过浙江大学医学院附属邵逸夫医院生殖医学伦理委员会审查(SRRSHRMC-OC202208),并获得患者知情同意签字。
离体卵巢组织送达实验室后,在无菌操作台内用20 mL注射器的针头,配上10 mL的注射器,针口的斜面向下穿刺卵泡同时抽吸,将抽吸物置于L15培养液中,在体视显微镜下寻找到4枚卵丘-颗粒细胞复合体。将收集到的4枚卵丘-颗粒细胞复合体置入取卵冲洗液中充分洗涤,拆除颗粒细胞后见1枚MⅡ成熟卵母细胞和3枚生发泡期卵母细胞。
获得的成熟卵母细胞进行玻璃化冷冻,未成熟卵母细胞行IVM,培养24、48 h分别评估卵母细胞成熟情况,出现第一极体则判断为MⅡ,超过48 h未发育至MⅡ卵母细胞视为IVM失败。生发泡期卵母细胞培养24 h后未见成熟卵子,继续培养24 h仍未成熟予以废弃。
获取卵巢组织在卵泡抽吸结束后,在4 ℃冷台仔细分离卵巢皮质与髓质,去除卵巢髓质组织,将卵巢皮质组织切割成大小为8 mm×8 mm×1 mm的组织块,共获得12片卵巢皮质进行玻璃化冷冻。冷冻结束后,取其中1片卵巢皮质组织和所有卵巢髓质组织行病理检查,未见肿瘤细胞。
2. 讨论
本文报道了一例15岁青春期霍奇金淋巴瘤患者在未经促排治疗的离体卵巢组织中直接穿刺获得成熟卵母细胞进行卵子冷冻。尽管此MⅡ卵母细胞是否具有受精、胚胎生长、着床和活产的能力未确定,但仍可提示对于性腺轴反馈已建立的青春期患者,成熟卵母细胞冷冻是一种可供选择的生育力保存方式。
目前,对于青春期及青春期前恶性肿瘤患者行生育力保存的方式主要为卵巢组织冷冻。有研究提倡在卵巢组织冷冻的同时可联合IVM技术[4],并证实在离体卵巢组织中可穿刺出未成熟卵母细胞[5-6]。然而,离体卵巢组织收集的卵子行IVM后成熟率非常低,据Fasano等[7]报道,青春期后患者卵子行IVM成熟率只有28.1%,青春期前患者卵子行IVM成熟率更低,只有10.3%。另有研究结果显示,在8~41岁患者卵巢组织冷冻前对离体卵巢组织穿刺的卵泡进行IVM后,平均卵母细胞成熟率只有29%,经IVM成熟的卵母细胞冷冻后解冻的存活率只有64%[8]。IVM和冷冻过程的多重损伤叠加导致减数分裂纺锤体异常、线粒体功能障碍等,这可能是IVM冻融卵母细胞妊娠结局较差的原因[9]。
与需要经历大量体外处理才能成熟至MⅡ阶段的生发泡期卵母细胞不同,直接获得的MⅡ卵母细胞可以更快地进行玻璃化,更有可能保持细胞存活。成熟卵母细胞冷冻已经是一项成熟的技术,也已经被公认为生育力保存的有效手段。目前,成熟卵母细胞解冻复苏率可达90%以上,受精率、优质胚胎形成率、妊娠率与新鲜卵母细胞相当[10]。但是,对于青春期前及青春期初患者,由于性腺轴反馈尚未建立,临床上通常不对这部分患者进行促排卵取卵。然而,Hanfling等[11]报道了在2例青春期前患者卵巢组织冷冻保存处理中发现成熟卵子;Fouks等[12]研究显示,青春期前受试者中有3.1%的卵母细胞处于MⅡ阶段,但该研究对青春期前的界定标准较为模糊,受试者中可能存在青春初期女性。本文资料在青春初期从未经促排卵治疗的离体卵巢组织中直接穿刺获得成熟卵母细胞,进一步证实了在青春初期女性中通过卵巢组织冷冻和获取成熟卵子行卵母细胞冷冻来保留生育能力的可能性。需要注意的是,本病例患有霍奇金淋巴瘤,因一线治疗失败进行了一次C1程IGEV方案化疗,其中异环磷酰胺是一种烷化剂类化疗药物和免疫抑制剂。研究表明异环磷酰胺可激活静止的原始卵泡发育为成熟卵泡[13-14],而高剂量烷基化剂可导致不育[15]。异环磷酰胺与本病例体内卵母细胞成熟是否存在关联,目前尚不清楚。
基于本文资料,我们认为,对于青春期性腺轴反馈已建立患者,卵巢组织冷冻可能不是唯一的生育力保存方式,在时间允许下可考虑促排卵取卵冻存卵母细胞,或者根据月经周期判断处于排卵期者,在卵巢组织冷冻前尝试穿刺取卵获得自然周期成熟卵母细胞行卵母细胞冷冻,进而避免离体卵巢组织在低温运输及处理过程中对卵母细胞的损伤,同时联合卵巢组织冷冻及IVM技术,提高患者生育力保存概率。
Acknowledgments
研究得到浙江省“尖兵领雁+X”研发公关计划(2024 C03242)支持
Acknowledgments
This work was supported by “Pioneer” and “Leading Goose” R&D Program of Zhejiang Province(2024C03242)
[缩略语]
体外成熟培养(in vitro maturation,IVM);第二次减数分裂中期(metaphase Ⅱ,MⅡ)
利益冲突声明
所有作者均声明不存在利益冲突
Conflict of Interests
The authors declare that there is no conflict of interests
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